Тэг: расходные материалы

Какое дополнительное оборудование необходимо для полноценной работы на MALDI Biotyper?

Как уже было сказано, пробоподготовка для масс-спектрометрического анализа проста.

Лаборанту лишь нужно нанести колонию с чашки на мишень и добавить раствор матрицы. Для этой процедуры необходимы только петли и дозатор позволяющий добавлять 2мкл с соответствующими наконечниками.

Для облегчения и ускорения повседневной работы, мы рекомендуем использовать электронный дозатор с функцией многократной порционной выдачи объема 1-2 мкл.

 

Для максимально увеличения сроком хранения, HCCA матрица поставляется в исследовательскую лабораторию в виде сухого кристаллического порошка. Лаборанту необходимо один раз в 1-2 недели приготовить раствор матрицы. Процедура требует наличия набора дозаторов соответствующего объема и миницентрифуга-вортекс.

Факультативно, для соблюдения точности протокола мы также рекомендуем использовать аналитические весы с точностью до 0.1 мг для дозировки кристаллической матрицы. Отвес кристаллов удобнее производить тонким химическим шпателем.

 

В некоторых случаях (около 5% от всей работы) исследователю понадобится провести процедуру дополнительной экстракции белков из колонии микроорганизмов. Процедура проста и занимает не более 15-20 минут. Для этого потребуется наличие лабораторной центрифуги на 12 000 g для микропробирок 1.5 мкл.

 

По окончании работы с системой MALDI Biotyper, лаборанту потребуется помыть стальную мишень с нанесенными образцами. Для удобства выполнения этой процедуры мы рекомендуем иметь стальную или стеклянную емкость диаметром ~100 мм  и высотой  ~50 мм

 

Общий список дополнительного оборудования выглядит следующим образом:


Оборудование

Рекомендуемый производитель

Центрифуга для микропробирок 12000g

Microspin 12, SIA Biosan или аналог

Миницентрифуга-Вортекс

MSC-3000, SIA Biosan или аналог

Аналитические весы с точностью не менее 0.1 мг

Sartorius TE64, или аналог

Механический дозатор объемом от 0.2 мкл

Дозатор mLINE 0.1-3 мкл, Biohit, или аналог

Механический дозатор объемом до 20 мкл

Дозатор mLINE 2-20 мкл, Biohitили аналог

Механический дозатор объемом до 100 мкл

Дозатор mLINE 20-200 мкл, Biohitили аналог

Механический дозатор объемом до 1000 мкл

Дозатор mLINE 100-1000 мкл , Biohitили аналог

Электронный дозатор, имеющий шаг 0,2-2 мкл

Дозатор eLINE 0.2-10 мкл, Biohitили аналог

Металический шпатель для точного забора порошков из пробирок

Шпатель двухсторонний микро,

лопатка 40х3 мм, длина 150 мм, нержавеющая сталь, Bochem

Химический стакан, 250 мл

любого производителя

Стеклянный или металлический резервуар для чистки мишеней MALDI (Ø ~100 мм, высота ~50 мм)

любого производителя

Штатив-рабочее место для 1.5 мл и 0.2 мл пробирок

любого производителя

 

Какие расходные материалы необходимы для работы с MALDI Biotyper?

Одним из ключевых преимуществ системы MALDI Biotyper является небольшое количество и дешевизна расходных материалов, необходимых в повседневной рутинной практике.

 

Для прямой идентификации используется:

  • Одноразовая пластиковая бактериологическая петля объемом 1 мкл для забора колонии с чашки и нанесения ее на стальную мишень (чип). 
  • Заранее приготовленный раствор матрицы, наносимый в объеме 1-2 мкл с использованием дозатора и соответствующего наконечника.
  • И калибровочный стандарт, представляющий собой белки E.Coli, наносимый также в объеме 1-2 мкл на одну из 96-48-24 позиций мишени (чипа).

Дополнительные расходные материалы для MALDI Biotyper необходимы в двух основных случаях:

  • Приготовление раствора матрицы и калибровочного стандарта
  • Проведение процедуры дополнительной экстракции белков микроорганизмов для повышения точности идентификации

Ниже приведен список химических реагентов которые могут понадобиться в повседневной работе:

 

Реагенты

Рекомендуемый производитель

α-циано-4-гидроксикоричная кислота, фасованная

HCCA portioned, # 8255344, Bruker Daltonics

Бактериальный стандарт

Bruker Bacterial Test Standard # 8255343 , Bruker Daltonics

Ацетонитрил хроматографической чистоты

Ацетонитрил ≥ 99.9%, LC-MS CHROMASOLV® grade - Fluka (# 34967, Sigma-Aldrich GmbH)

Ультрачистая вода

ddH2O CHROMASOLV® for HPLC (#270733, Sigma-Aldrich GmbH)

Этанол  хроматографической чистоты

Этанол ≥ 99.8% (GC), (неденатурированный) (# 24102, Sigma-Aldrich GmbH)

Муравьиная кислота

Муравьиная кислота ~ 98% (T) (# 06440, Sigma-Aldrich GmbH)

Трифторуксусная кислота

TFA > 98.5% (# T62200, Sigma-Aldrich GmbH)

 

Список расходных материалов:

 

  • Бактериологические петли для забора и нанесения на чип колоний микроорганизмов объемом 1 мкл
  • Типсы для дозаторов соответствующего объема
  • Салфетки безволоконные (например, Kimwipes EX-L, KimTech Science)
  • Латексные или нитриловые перчатки без талька